NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)试剂盒--叶绿体、微生物

三羧酸循环系列

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XM-F-SSS00648样紫外法456
XM-W-SSS00696样微板法882


一、产品简介

NADP - 苹果酸脱氢酶(NADP - MDH),是参与细胞代谢过程的一种重要酶。它在叶绿体、微生物中广泛存在,在细胞的能量代谢和物质合成等生理过程中起着关键作用。

定义与功能:

定义:NADP - MDH是一种能够催化苹果酸和NADP⁺之间氧化还原反应的酶,

使苹果酸氧化为草酰乙酸,同时将NADP⁺还原为NADPH。

功能:在叶绿体中,NADP - MDH参与光合作用的碳代谢过程,

通过调节苹果酸和草酰乙酸的含量,维持细胞内碳代谢的平衡;

在微生物中,它参与能量代谢和物质合成等多种生理过程,对微生物的生长和生存至关重要。

催化机制:

NADP - MDH催化苹果酸和NADP⁺之间的氧化还原反应,苹果酸作为底物提供电子和质子,

将其传递给NADP⁺,使其还原为NADPH,同时苹果酸被氧化为草酰乙酸。

这一反应在细胞的代谢网络中起着重要的连接作用。

活性测定方法:

本试剂盒采用微板法进行NADP - MDH活性测定。通过在特定波长下检测NADPH的生成速率来计算NADP - MDH的酶活性大小。

NADPH在该波长处有特征吸收峰,其生成速率与NADP - MDH的酶活性成正比。

通过测定反应体系中NADPH的生成量,可以间接计算出NADP - MDH的酶活性。

重要性:

NADP - MDH在叶绿体和微生物的生理过程中具有重要意义。

在叶绿体中,它对于光合作用的正常进行和碳代谢的平衡维持起着关键作用,

有助于植物的生长和发育;在微生物中,它参与能量代谢和物质合成等过程,

保障了微生物的正常生长和生存。通过准确测定NADP - MDH的活性,

可以深入了解叶绿体和微生物的代谢状态,为相关研究和应用提供重要的参考依据。

二、所需的仪器和用品

进行NADP - MDH活性测定实验时,需要以下仪器和用品:

酶标仪

用途:用于测量NADPH在特定波长处的光吸收值。

酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下的吸光度值。

注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到检测所需的特定波长。

同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量结果的准确性。

96孔板(UV板)

用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。

UV板具有透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。

注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品和试剂的加入量要准确。

低温离心机

用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取NADP - MDH。

低温条件有助于保持NADP - MDH的活性,减少其在处理过程中的损失。

注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),

并确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中,要密切关注离心机有无异常声音等状况,

若出现异常状况应立即停止离心。

可调式移液器

用途:用于精确移取样品溶液和试剂。

可调式移液器能够根据不同的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。

注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,

并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时,

要及时更换移液器头,以防止交叉污染。

研钵

用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。

在NADP - MDH活性测定实验中,研钵可能用于研磨叶绿体、微生物等样品,

以便提取其中的NADP - MDH。

注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,

并确保研磨过程中样品不会受到污染。

用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。

在NADP - MDH活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,以确保实验的准确性。

注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,

并及时更换以保持其低温效果。