一、细胞基本属性
细胞名称：A375人恶性黑色素瘤细胞
细胞别称：A375细胞；恶性黑色素瘤细胞；皮肤黑色素瘤细胞
种属来源：人（Homo sapiens）
疾病背景：来源于转移性皮肤恶性黑色素瘤患者的肿瘤组织
组织来源：皮肤恶性黑色素瘤组织
生长特性：贴壁生长（依赖胰酶消化传代）
细胞形态：上皮样细胞，贴壁后呈多角形或纺锤形
细胞代数：P4 - P10（建议使用早期代数以保证遗传稳定性）
细胞规格：1×10⁶ cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管（含无血清冻存液）
培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS+1%双抗）
培养条件：气相：5% CO₂+95%空气；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂）， - 150℃以下长期保存
倍增时间：约24 - 48小时（依赖培养条件及传代密度）
供应限制：仅限科研用途，不可用于临床治疗或动物实验
二、细胞培养操作指南
收货处理：冻存管：37℃水浴快速解冻，离心后重悬于预热培养基；培养瓶：75%酒精表面消毒后静置培养箱平衡1小时
传代标准：细胞融合度达80% - 90%（通常每2 - 3天传代一次）
传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
消化方法：使用0.25% Trypsin - EDTA（含0.02% EDTA）；37℃消化1 - 2分钟，显微镜下观察细胞间隙增大后终止
注意事项：避免过度消化（可能引起细胞膜损伤）；传代后需轻柔吹打以保证单细胞悬液
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及血清替代物）
细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 5×10⁶ cells/mL
冻存步骤：离心收集对数期细胞，重悬于预冷冻存液；梯度降温：4℃ 30min → - 20℃ 2h → - 80℃过夜 → 液氮长期保存
复苏验证：复苏后24小时检测存活率（台盼蓝染色法≥90%）；功能验证：细胞增殖实验（P5代细胞应保持肿瘤细胞典型增殖速率）
四、售后服务承诺
重发标准：1. 运输过程温度异常导致细胞死亡（需提供物流温度记录）；2. 到货72小时内证实支原体/真菌污染（需提供第三方检测报告）；3. STR基因分型与数据库不匹配；4. 复苏存活率低于85%（需提供台盼蓝染色影像）
不予重发情形：1. 客户超72小时未进行细胞复苏；2. 使用非推荐培养基或添加剂导致异常；3. 未按规范进行冻存导致反复冻融损伤；4. 实验操作污染未及时反馈
