一、细胞基本属性
- 细胞名称：A549+RFP人肺癌细胞（RFP - Labeled Human Lung Adenocarcinoma Cells）
- 细胞别称：RFP标记A549细胞；A549 - RFP稳转株；红色荧光肺癌细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 组织来源：肺腺癌组织（经病理学确诊）
- 生长特性：贴壁生长（依赖细胞间接触及培养基组分）
- 细胞形态：上皮样多角形，融合后呈单层铺展，稳定表达红色荧光蛋白（RFP）
- 细胞代数：P5 - P15（经荧光强度筛选，保证标记稳定性）
- 细胞规格：1×10⁶ cells/T25培养瓶 或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：RPMI - 1640（含10%FBS+1%双抗+400μg/mL G418维持筛选压力）
- 培养条件：气相：5%CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10%DMSO及细胞保护剂），液氮长期保存（-196℃）
- 荧光特性：RFP激发波长553nm/发射波长574nm，需荧光显微镜观察
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床治疗或活体实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去冻存液后重悬于预热培养基
- 培养瓶：酒精擦拭表面，静置培养箱4小时待细胞贴壁后换液
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（建议每2 - 3天传代一次）
- 传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
- 消化方法
- 使用0.25%胰酶 - EDTA（含酚红指示剂）
- 37℃消化2 - 3分钟，轻拍瓶壁至细胞脱落，立即加血清终止
- 注意事项
- 传代后48小时内避免强光照射以保护荧光蛋白
- 定期检测G418抗性，维持筛选压力防止RFP表达丢失
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10%DMSO+10%海藻糖）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
- 冻存步骤
- 消化离心后重悬于冻存液，分装至冻存管
- 程序降温：4℃ 30min→ - 80℃ 24h→液氮长期保存
- 复苏验证
- 复苏后48小时内检测荧光强度（流式细胞仪验证RFP阳性率≥95%）
- 功能验证：细胞增殖曲线及药物敏感性实验（与亲本A549一致性对比）
四、售后服务承诺
- 重发标准
- 运输中干冰耗尽导致细胞失活（需提供物流温度记录）
- 到货7天内证实细菌/真菌污染（需提供污染样本检测证据）
- RFP阳性率低于90%（流式细胞术检测报告）
- STR分型与ATCC标准数据库不匹配
- 不予重发情形
- 未使用G418维持筛选导致RFP表达丢失
- 频繁紫外线照射引起荧光淬灭
- 使用非推荐培养基导致细胞生长异常
- 未按规范进行支原体检测直接用于共培养实验
