一、细胞基本属性
- 细胞名称：EA.hy926人脐静脉融合细胞
- 细胞别称：EA.hy926；人脐静脉内皮融合细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 细胞背景：由人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与A549肺癌细胞通过聚乙二醇融合建立的永生化融合细胞系
- 组织来源：人脐静脉内皮细胞
- 生长特性：贴壁生长（依赖明胶包被培养器皿）
- 细胞形态：融合后呈典型内皮细胞铺路石样单层，局部可见融合核现象
- 细胞代数：建议使用P5 - P15代（保持内皮标志物表达稳定性）
- 细胞规格：1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含血清型冻存液）
- 培养基：高糖DMEM（含10% FBS+1%内皮细胞生长补充剂+1%丙酮酸钠）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：血清型冻存液（含10% DMSO），液氮长期保存
- 功能特性：保留内皮细胞特征（CD31/vWF阳性），兼具持续增殖能力
- 供应限制：仅限体外研究，不可用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管复苏：37℃水浴快速解冻，离心去冻存液后重悬于预热培养基
- 贴壁培养：明胶预包被培养皿，初始接种密度建议2×10⁴ cells/cm²
- 传代标准：融合度达80% - 90%（通常每4 - 5天传代）
- 传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25% Trypsin - EDTA溶液
- 37℃消化3 - 5分钟，细胞边缘卷曲时轻柔拍打终止
- 注意事项：
- 传代后需补充新鲜bFGF（终浓度5ng/mL）
- 避免频繁观察扰动，融合过程需持续48小时以上
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：基础培养基+20% FBS+10% DMSO
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
- 冻存步骤：
- 对数生长期细胞经消化离心后重悬
- 程序降温：4℃平衡30分钟后转移至 - 80℃过夜，次日转入液氮
- 复苏验证：
- 复苏存活率≥85%（台盼蓝检测）
- 功能验证：CD31免疫荧光染色确认内皮特性
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输温度异常导致细胞团破裂（需提供物流温度记录）
- 到货72小时内证实微生物污染（需提供无菌检测报告）
- 复苏后存活率低于80%（提供台盼蓝染色照片）
- 内皮标志物表达缺失（提供CD31免疫染色证据）
- 不予重发情形：
- 未使用明胶包被导致细胞贴壁失败
- 自行修改培养基配方引发表型改变
- 超过建议代数（P15）仍继续传代
- 未按要求进行定期支原体检测
