一、细胞基本属性
- 细胞名称：人脐静脉内皮细胞永生化+GFP（HUVEC - immortalized+GFP）
- 细胞别称：HUVEC+GFP；永生化脐静脉内皮细胞+GFP；GFP标记人脐静脉内皮细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 年龄性别：健康成人（性别不限，供体筛选无遗传病史及感染史）
- 组织来源：脐静脉内皮组织
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白或明胶包被培养器皿）
- 细胞形态：单层铺路石样，融合后呈规则多角形，GFP荧光均匀表达
- 细胞代数：P5 - P12（经永生化处理，保证增殖稳定性与GFP持续表达）
- 细胞规格：1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：内皮细胞专用培养基（含5% FBS+内皮生长因子+1%青霉素/链霉素+200μg/mL G418维持筛选）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO+细胞保护剂），液氮长期保存（-150℃以下）
- GFP特性：稳定表达绿色荧光蛋白（转染载体：pLVX - EF1α - GFP；嘌呤霉素筛选）
- 供应限制：仅限于科学研究，不可用于临床、药物生产或活体实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后重悬于预温培养基；培养瓶：酒精擦拭表面后静置2小时，待温度平衡后更换新鲜培养基。
- 传代标准：融合度达80% - 90%（推荐传代间隔3 - 4天，避免过度生长影响GFP信号）
- 传代比例：1:3至1:4（建议接种密度1×10^4 cells/cm²，低密度利于GFP表达稳定性）
- 消化方法：使用0.25%胰酶 - EDTA溶液，37℃消化1 - 2分钟，轻柔吹打至细胞脱落，立即加入含血清培养基终止。
- 注意事项：1. 传代后48小时内避免频繁观察荧光，减少光漂白；2. 培养时需持续添加G418（200μg/mL）维持筛选压力；3. 若GFP信号减弱，可通过流式细胞术分选高表达群体。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO+20% FBS+渗透保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度1×10^6 - 2×10^6 cells/mL（高密度提升复苏存活率）
- 冻存步骤：1. 消化离心后重悬于冻存液；2. 程序降温：4℃ 30分钟 → -20℃ 2小时 → -80℃过夜 → 液氮长期保存。
- 复苏验证：1. 复苏后24小时内检测存活率（台盼蓝染色≥90%）；2. GFP表达验证：荧光显微镜观察＞95%细胞荧光信号；3. 功能检测：体外血管形成实验（Matrigel管腔结构形成能力）
四、售后服务承诺
- 重发标准：1. 干冰运输超温导致细胞死亡（需提供物流温度记录证明）；2. 到货72小时内证实细菌/支原体污染（需第三方检测报告）；3. 复苏后GFP阳性率＜90%（流式细胞术检测）；4. STR鉴定与说明书不符。
- 不予重发情形：1. 未按规范添加G418导致GFP丢失；2. 反复冻融或延迟复苏超过48小时；3. 使用非推荐包被基质或培养基；4. 未定期检测支原体引发交叉污染。
