一、细胞基本属性
细胞名称:人诱导多能干细胞(Human Induced Pluripotent Stem Cells)
细胞别称:hiPSCs;iPS细胞;诱导多能干细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
重编程来源:健康成人成纤维细胞(经转录因子重编程)
组织来源:皮肤成纤维细胞或其他体细胞(经体外重编程)
生长特性:贴壁生长(依赖基质胶或饲养层细胞),形成致密克隆
细胞形态:典型多能干细胞克隆形态,边缘光滑,核质比高
细胞代数:P3 - P10(经严格质控确保多能性及核型稳定)
细胞规格:1×10^6 cells/冻存管(含无血清冻存液)或T25培养瓶(活细胞)
培养基:专用无血清培养基(含bFGF、TGF - β等维持多能性因子)
培养条件:气相:5% CO₂+95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存(-196℃)
多能性标志物:OCT4、SOX2、NANOG阳性(免疫荧光/流式验证)
供应限制:仅限科研用途,不可用于临床治疗、药物筛选或异种移植
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,加入预温培养基离心去冻存液后重悬接种
- 培养瓶:酒精消毒表面,静置培养箱1小时平衡后换液
传代标准:克隆融合度达80% - 90%(通常每5 - 7天传代一次)
传代比例:1:3至1:6(根据克隆密度调整,建议接种密度1×10^4 cells/cm²)
消化方法:
- 使用0.5 mM EDTA或温和消化酶(如Accutase)
- 37℃消化3 - 5分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落,立即中和消化液
注意事项:
- 传代后添加ROCK抑制剂(Y - 27632)提升贴壁存活率
- 每日观察克隆形态,避免分化(边缘松散或扁平化需及时处理)
- 培养基每日更换,维持pH 7.2 - 7.4
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO+30%培养基+60%基础培养液)
细胞密度:冻存浓度:1×10^6 - 2×10^6 cells/mL(高密度提升复苏效率)
冻存步骤:
- 消化收集细胞,离心后重悬于冻存液
- 程序降温:4℃ 30分钟→-80℃ 24小时→转移至液氮长期保存
复苏验证:
- 复苏后48小时检测存活率(台盼蓝染色≥85%)
- 多能性验证:拟胚体形成实验或三胚层分化潜能检测
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输过程液氮罐泄漏或温度记录异常(需提供物流凭证)
2. 到货72小时内检测出支原体污染(需提供第三方检测报告)
3. 细胞复苏后多能性标志物表达缺失(需提供免疫荧光原始数据)
4. STR分型与产品描述不一致
不予重发情形:
1. 未使用推荐基质胶或饲养层导致细胞分化
2. 未按时换液或培养基过期引发细胞状态异常
3. 自行更改培养条件(如CO₂浓度、温度偏离标准)
4. 未进行定期核型分析导致遗传异常未被及时发现