一、细胞基本属性
细胞名称：MDA - MB - 231+GFP人乳腺癌细胞
细胞别称：MDA - MB - 231 GFP+、三阴性乳腺癌细胞GFP标记、乳腺腺癌细胞GFP稳定株
种属来源：人（Homo sapiens）
年龄性别：女性乳腺癌患者来源（临床病理特征明确）
组织来源：乳腺组织（三阴性乳腺癌原发灶）
生长特性：贴壁生长（依赖胶原包被培养器皿）
细胞形态：上皮样不规则多角形，GFP标记后呈现稳定绿色荧光
细胞代数：P5 - P15（建议使用P8代内细胞保证GFP表达稳定性）
细胞规格：1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含胎牛血清冻存液）
培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS+1%双抗+200μg/mL G418筛选）
培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件：含血清冻存液（含10% DMSO），液氮气相长期保存
荧光特性：EGFP稳定表达（需定期荧光显微镜观察及流式检测）
供应限制：仅限肿瘤机制研究，禁止临床应用或转基因生物实验
二、细胞培养操作指南
收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心后重悬于预热培养基
- 培养瓶：酒精消毒后直接置于培养箱，4小时后首次换液
传代标准：融合度达80% - 90%（高密度易引发自发分化）
传代比例：1:3至1:6（推荐接种密度1×10^4 cells/cm²）
消化方法：
- 使用0.25% Trypsin - EDTA（含0.5mM EDTA）
- 37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落
注意事项：
- GFP表达强度随代数增加可能衰减，需定期流式分选
- 传代后48小时内避免抗生素筛选以维持GFP稳定性
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：含血清冻存液（含20% FBS+10% DMSO）
细胞密度：冻存浓度：5×10^6 cells/mL
冻存步骤：
- 消化离心后缓慢滴加冻存液混匀
- 程序降温：4℃ 30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期保存
复苏验证：
- 荧光显微镜观察GFP表达率（需≥98%）
- 功能验证：Transwell侵袭实验（P8代细胞应保持基础侵袭能力）
四、售后服务承诺
重发标准：
1. 运输过程温度记录异常导致细胞失活（需提供物流温度曲线）
2. 5日内证实支原体污染（需提供第三方检测报告）
3. GFP表达率低于90%（流式细胞术检测）
4. 细胞STR谱系与ATCC标准不符
不予重发情形：
1. 未使用G418维持筛选导致GFP丢失
2. 未按规范胶原包被培养器皿影响贴壁
3. 擅自使用非推荐传代方法导致分化
4. 未定期检测荧光强度导致实验数据异常
（注：所有操作需在生物安全二级实验室进行，建议每3代进行一次支原体检测）
