一、细胞基本属性
细胞名称:人膜间质细胞(MET - 5A)
细胞别称:MET5A;间皮细胞系;胸膜间皮细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
年龄性别:成年女性(供体无胸膜疾病史)
组织来源:非恶性胸膜积液(经永生化处理)
生长特性:贴壁生长(依赖胰蛋白酶消化传代)
细胞形态:单层铺展,典型上皮样多边形结构
细胞代数:P5 - P15(建议使用中低代数以维持表型稳定)
细胞规格:1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含血清冻存液)
培养基:RPMI - 1640(含10% FBS+1%双抗)
培养条件:气相:5% CO₂+95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:含血清冻存液(含10% DMSO),液氮长期保存
倍增时间:约24 - 36小时(与血清批次相关)
供应限制:科研用途专用,禁止临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
1. 冻存管复苏:37℃水浴60秒内解冻,离心去冻存液后重悬于预热培养基
2. 培养瓶处理:酒精擦拭外壁,静置4小时后首次换液
传代标准:融合度达80% - 90%(建议每周传代2次)
传代比例:1:3至1:5(推荐接种密度1×10^4 cells/cm²)
消化方法:
1. 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA溶液
2. 室温消化3 - 5分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落
注意事项:
1. 消化终止需添加含血清培养基
2. 传代后48小时内避免频繁移动培养瓶
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:完全培养基+10% DMSO
细胞密度:5×10^5 - 1×10^6 cells/mL
冻存步骤:
1. 离心收集对数生长期细胞
2. 梯度降温程序:4℃平衡30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期储存
复苏验证:
1. 复苏存活率≥85%(台盼蓝法检测)
2. 形态验证:贴壁24小时后应呈现典型上皮样铺展
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 干冰运输中温度异常(需提供物流温度记录)
2. 到货72小时内证实微生物污染(需第三方检测报告)
3. 细胞STR谱系与数据库记录不匹配
4. 复苏存活率低于80%
不予重发情形:
1. 使用非指定培养基超过两代
2. 未按推荐密度进行传代导致老化
3. 未执行推荐的冻存梯度降温程序
4. 未定期进行支原体检测(建议每月检测)
注:本产品需配合专用培养基使用,建议每3代进行一次STR鉴定以确认遗传稳定性