一、细胞基本属性
细胞名称:NCI - H3122人非小细胞肺癌细胞
细胞别称:H3122;非小细胞肺癌细胞;肺腺癌细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
疾病背景:来源于非小细胞肺癌患者肺腺癌组织,携带EML4 - ALK融合基因变异
组织来源:肺腺癌组织
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:上皮样多角形,贴壁紧密,高密度时呈铺路石样排列
细胞代数:P5 - P15(推荐使用代数以保证基因表达稳定性)
细胞规格:1×10^6 cells/T25培养瓶 或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:RPMI - 1640培养基(含10% FBS+1%双抗)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存
倍增时间:~24 - 48小时(依赖培养条件及融合度)
供应限制:仅限于科学研究,不可用于临床治疗或生物体内实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预热培养基
培养瓶:酒精消毒外壁后直接置于培养箱平衡2小时
传代标准:融合度达80% - 90%(建议每2 - 3天传代一次)
传代比例:1:3至1:5(推荐初始接种密度1×10^4 cells/cm²)
消化方法:
使用0.25% Trypsin - EDTA溶液(含0.02% EDTA)
37℃消化3 - 5分钟,显微镜下观察细胞间隙扩大后终止
注意事项:
传代前需平衡培养基温度至37℃
建议使用胶原蛋白包被培养皿增强贴壁效率
定期检测EML4 - ALK融合基因表达稳定性
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO+90% FBS)
细胞密度:冻存浓度:5×10^5 - 1×10^6 cells/mL
冻存步骤:
消化后离心收集细胞,轻柔重悬于冻存液
梯度降温程序:4℃ 30分钟→ - 20℃ 2小时→ - 80℃过夜→液氮储存
复苏验证:
复苏后48小时内检测存活率(台盼蓝染色≥90%)
功能验证:CCK - 8法检测增殖能力(P8代细胞应维持典型生长曲线)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 物流温度记录异常导致细胞失活(需提供运输温度曲线)
2. 到货72小时内证实微生物污染(需提供检测报告)
3. STR分型与数据库记录不符
4. 复苏后活率低于承诺值(需提供染色检测视频)
不予重发情形:
1. 未使用推荐包被基质导致贴壁失败
2. 未定期检测支原体造成实验室污染
3. 未按标准传代导致基因表达漂移
4. 超过建议代数范围继续使用