一、细胞基本属性
细胞名称
U251 MG/TMZ人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞
细胞别称
U251-TMZ耐药株；胶质瘤耐药细胞模型
种属来源
人（Homo sapiens）
病理背景
胶质母细胞瘤（WHO IV级），经替莫唑胺诱导耐药
组织来源
脑部星形胶质瘤组织（经手术切除样本建立）
生长特性
贴壁生长（需预包被基质胶的培养器皿）
细胞形态
不规则梭形或多角形，核质比高，接触抑制减弱
细胞代数
P5 - P15（建议使用P8 - P12代进行耐药相关实验）
细胞规格
1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含专用冻存液）
培养基
DMEM高糖培养基（含10% FBS+1%青霉素/链霉素+100μM替莫唑胺维持耐药性）
培养条件
气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件
无血清冻存液（含DMSO及耐药维持因子），-150℃以下长期保存
倍增时间
~72 - 96小时（耐药株增殖速率低于亲本细胞）
供应限制
仅限肿瘤耐药机制研究，不可用于临床或药物筛选以外的用途
二、细胞培养操作指南
收货处理
冻存管：37℃水浴快速解冻，离心后重悬于含替莫唑胺的培养基；
培养瓶：酒精消毒表面后静置培养箱4小时，避免震动
传代标准
细胞融合度达80% - 90%（耐药株贴壁性较弱，需缩短传代间隔）
传代比例
1:3至1:4（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
消化方法
使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA（含Ca²⁺/Mg²⁺缓冲液）；
37℃消化3 - 5分钟，轻柔吹打避免细胞团聚集
注意事项
传代后需维持替莫唑胺浓度防止耐药性丢失；
培养液每48小时更换以清除代谢副产物
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方
专用无血清冻存液（含10% DMSO+5%海藻糖+耐药维持因子）
细胞密度
冻存浓度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
冻存步骤
消化后离心去除胰酶，重悬于预冷冻存液；
程序降温：4℃ 30min → -80℃过夜 → 液氮长期储存
复苏验证
复苏后48小时检测细胞活力（台盼蓝染色存活率≥85%）；
耐药性验证：CCK - 8法检测IC50值（需与亲本细胞对比）
四、售后服务承诺
重发标准
1.干冰运输链断裂导致细胞失活（需提供温度记录证明）；
2.7天内证实支原体污染（需提供荧光染色或PCR报告）；
3.耐药基因表达量低于标准（需提供qPCR检测数据）；
4.STR分型与ATCC数据库不一致
不予重发情形
1.未按规范维持替莫唑胺浓度导致耐药性丢失；
2.使用非指定培养基或血清品牌；
3.反复冻融超过2次造成细胞损伤；
4.未定期检测耐药相关标志物即进行下游实验
