一、细胞基本属性
- 细胞名称：HCT116AKT1/2(-/-)细胞
- 细胞别称：HCT116 AKT双敲除细胞；结肠癌AKT缺陷细胞系
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 疾病背景：结直肠癌来源（供体确诊为结肠腺癌）
- 组织来源：结肠癌原发灶组织
- 生长特性：贴壁生长（依赖胰蛋白酶消化传代）
- 细胞形态：上皮样贴壁生长，单层细胞呈多边形或梭形
- 细胞代数：P5 - P15（推荐使用代数，确保基因型稳定性）
- 细胞规格：1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含血清型冻存液）
- 培养基：McCoy's 5A培养基（含10% FBS+1%双抗）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：含血清冻存液（含10% DMSO及胎牛血清），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：~24 - 36小时（依赖培养密度及血清批次）
- 基因修饰：CRISPR/Cas9技术敲除AKT1及AKT2基因（需提供测序验证报告）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心后重悬于预热培养基
- 培养瓶：酒精消毒表面，静置培养箱4小时待细胞贴壁
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（通常每2 - 3天传代一次）
- 传代比例：1:3至1:6（推荐接种密度1×10^4 cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25% Trypsin - EDTA溶液
- 37℃消化3 - 5分钟，显微镜下观察细胞间隙扩大后终止
- 注意事项：
- 避免消化过度（防止细胞膜完整性受损）
- 传代后6小时内避免移动培养瓶以确保贴壁
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：血清型冻存液（含10% DMSO+90%胎牛血清）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10^6 - 1×10^7 cells/mL
- 冻存步骤：
- 离心收集对数生长期细胞，重悬于冻存液
- 程序降温：4℃ 30min → -80℃ 24h → 液氮长期保存
- 复苏验证：
- 复苏后存活率≥90%（台盼蓝染色法）
- 基因型验证：Western Blot检测AKT1/2蛋白缺失
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输过程温度记录异常导致细胞死亡（需提供温度监测曲线）
- 7日内经qPCR证实支原体污染
- 细胞复苏存活率低于85%（需提供染色结果）
- STR分型与数据库不匹配
- 不予重发情形：
- 客户未按规范进行细胞传代导致污染
- 使用非McCoy's 5A培养基引发表型改变
- 液氮保存设备故障导致反复冻融
- 未进行AKT基因型验证直接用于实验
注：本产品需配合AKT信号通路相关实验设计，建议定期进行基因表达谱检测以确认表型稳定性。
