一、细胞基本属性
细胞名称:犬肾上皮细胞(Madin - Darby Canine Kidney Cells, Type II)
细胞别称:MDCKII;犬肾小管上皮细胞
种属来源:犬(Canis lupus familiaris)
组织来源:肾脏远曲小管上皮组织
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:典型上皮样铺路石状单层,接触抑制后呈规则多边形
细胞代数:P3 - P10(推荐使用代数以确保屏障功能完整性)
细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:MEM基础培养基(含10% FBS + 1%非必需氨基酸+2mM L - 谷氨酰胺)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮气相长期保存
倍增时间:约18 - 24小时(受培养密度及传代方法影响)
供应限制:仅供体外研究使用,不可用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去冻存液后重悬于预热培养基
- 培养瓶:表面消毒后直接置于37℃培养箱平衡2小时
传代标准:细胞融合度达80% - 90%(通常每2 - 3天传代一次)
传代比例:1:4至1:6(建议接种密度1×10^4 cells/cm²)
消化方法:
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA溶液
- 37℃消化3 - 5分钟,显微镜下观察细胞边缘卷曲后终止
注意事项:
- 消化后需轻柔吹打避免细胞团块形成
- 传代后12小时建议全量换液以去除死细胞
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO + 90%基础培养基)
细胞密度:冻存浓度1×10^6 - 2×10^6 cells/mL
冻存步骤:
- 离心收集细胞后重悬于预冷冻存液
- 程序降温:4℃ 30分钟→ - 80℃过夜→转移至液氮长期保存
复苏验证:
- 复苏后48小时进行活力检测(台盼蓝拒染率≥90%)
- 功能验证:跨膜电阻检测(TEER值应符合标准范围)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输过程温度异常导致细胞死亡(需提供物流温度记录)
2. 到货72小时内证实微生物污染(需提供污染检测证据)
3. 细胞活率低于85%(按标准流程检测)
4. 物种鉴定结果与标识不符
不予重发情形:
1. 客户未按规范进行细胞复苏操作
2. 使用未经验证的培养基添加剂
3. 反复冻融导致细胞活性丧失
4. 未按要求进行定期支原体检测
(注:以上内容基于标准操作流程编制,具体实验条件需根据研究目的优化。)