一、细胞基本属性
- 细胞名称：血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cells）
- 细胞别称：VSMC；动脉平滑肌细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 年龄性别：健康成人（性别不限，供体筛选无心血管疾病史）
- 组织来源：动脉中膜层
- 生长特性：贴壁生长（依赖纤维连接蛋白包被）
- 细胞形态：长梭形或纺锤状，融合后呈“峰谷”样排列
- 细胞代数：P3 - P6（保证收缩表型与钙化诱导敏感性）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：Smooth Muscle Cell Medium（含5% FBS +血管生成因子+钙化诱导添加剂）
- 培养条件：气相：5% CO₂+ 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：约72 - 96小时（视钙化诱导阶段调整）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或药物开发
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入5mL预热培养基离心重悬
- 培养瓶：75%酒精消毒外壁，静置培养箱平衡4小时
- 传代标准：细胞融合度达70% - 80%（钙化诱导前需维持收缩表型）
- 传代比例：1:2至1:3（建议接种密度3×10³ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25% Trypsin - EDTA（含1mM Ca²⁺维持膜完整性）
- 37℃消化3 - 5分钟，轻柔拍打促进细胞脱离
- 注意事项：
- 钙化诱导阶段需更换高磷培养基（β - 甘油磷酸钠终浓度10mM）
- 每3天补充抗坏血酸（50μg/mL）促进基质矿化
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO +海藻糖保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤：
- 预冷冻存管至4℃，细胞悬液分装后梯度降温
- 程序降温：4℃ 30min → -20℃ 2h → -80℃ 12h → 液氮长期储存
- 复苏验证：
- 存活率≥90%（台盼蓝染色法）
- 功能验证：茜素红染色确认钙结节形成能力（P4代细胞应具备诱导潜力）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输过程温度记录异常（需提供物流温度监控数据）
- 到货48小时内证实支原体污染（需提供第三方检测报告）
- 细胞贴壁率低于80%（需提供接种后24小时显微照片）
- α - SMA免疫荧光鉴定未通过
- 不予重发情形：
- 未按说明书进行纤维连接蛋白包被
- 自行修改钙化诱导剂浓度导致矿化失败
- 使用非配套培养基培养超过2代
- 未定期进行Von Kossa染色监测钙化进程
（注：本试剂盒需配合专用矿化诱导添加剂使用，详细实验方案见随货技术文件）
