一、细胞基本属性
细胞名称:大鼠肝实质细胞(Rat Hepatocytes)
细胞别称:肝细胞;肝实质细胞
种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
年龄性别:健康成年大鼠(性别不限,供体筛选无肝脏疾病史)
组织来源:肝脏组织
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:多角形或立方形,排列成索状结构,核质比适中
细胞代数:P2 - P5(原代细胞传代有限,建议低代次使用)
细胞规格:5×10⁵ cells/T25胶原包被培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:Hepatocyte Culture Medium(含5% FBS +肝细胞生长因子+胰岛素 - 转铁蛋白 - 硒复合物)
培养条件:气相:5% CO₂+95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含12% DMSO及细胞保护剂), - 150℃以下长期保存
倍增时间:约48 - 72小时(依赖细胞活性与培养条件)
供应限制:仅限科研用途,不可用于临床诊疗或动物实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去除冻存液后重悬于预热培养基;培养瓶:75%酒精擦拭表面,置于培养箱静置4小时平衡
传代标准:细胞融合度达80% - 90%(原代细胞建议每5 - 7天传代)
传代比例:1:2至1:3(胶原酶消化后接种密度建议1×10⁴ cells/cm²)
消化方法:使用0.25%胶原酶IV型,37℃消化15 - 20分钟,通过轻柔吹打分离细胞团,100μm滤网过滤单细胞悬液
注意事项:避免机械损伤,消化后需离心去除残留酶液;首次换液建议在接种后6小时,去除死细胞碎片
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含12% DMSO+10%海藻糖)
细胞密度:冻存浓度:5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
冻存步骤:胶原酶消化后离心收集,重悬于预冷冻存液;程序降温:4℃平衡30分钟→冻存盒转移至 - 80℃过夜→液氮长期保存
复苏验证:复苏后12小时检测白蛋白分泌功能(ELISA法),台盼蓝染色存活率≥85%,贴壁率≥70%
功能验证:P3代细胞需通过CYP450酶活性检测(可选苯巴比妥诱导实验)
四、售后服务承诺
重发标准:1.运输过程温度记录异常(需提供物流温度曲线);2.7日内经PCR证实支原体污染;3.复苏后贴壁率低于60%(需提供相差显微镜影像);4.种属鉴定与STR信息不符
不予重发情形:1.未使用胶原包被培养器皿导致细胞贴壁失败;2.自行修改培养基配方影响细胞功能;3.未按规范进行胶原酶消化引发细胞团聚集;4.超过建议代次(P5)仍要求功能质控