一、细胞基本属性
细胞名称：人食管癌相关成纤维细胞（Human Esophageal Carcinoma-Associated Fibroblasts）
细胞别称：CAFs；癌相关成纤维细胞；食管癌间质细胞
种属来源：人（Homo sapiens）
年龄性别：食管癌患者（性别不限，供体经病理确诊且无其他系统性疾病）
组织来源：食管癌组织间质分离
生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被培养器皿）
细胞形态：长梭形或星形，胞质延展性强
细胞代数：P3 - P10（经功能验证确保活性及表型稳定）
细胞规格：5×10^5 cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管（含专用冻存液）
培养基：DMEM/F12（含10% FBS + 成纤维细胞活化因子添加剂）
培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：饱和湿度
冻存条件：无血清冻存液（含8% DMSO及细胞复苏保护剂），液氮长期保存
倍增时间：约36 - 60小时（与肿瘤微环境模拟条件相关）
供应限制：仅用于肿瘤微环境研究，禁止临床或诊断用途
二、细胞培养操作指南
收货处理：
• 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心后重悬于预热培养基
• 培养瓶：表面消毒后静置4小时再观察贴壁状态
传代标准：融合度达90% - 95%（接触抑制后仍保持增殖活性）
传代比例：1:3至1:4（建议初始密度3×10³ cells/cm²）
消化方法：
• 使用0.25%胰酶 - EDTA溶液
• 37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落
注意事项：
• 终止消化时加入含血清培养基中和
• 首次传代前需离心去除可能残留的肿瘤细胞
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：无血清冻存液（含8% DMSO + 海藻糖保护剂）
细胞密度：冻存浓度1×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
冻存步骤：
• 消化后离心收集高活性细胞团
• 程序降温：4℃ 30分钟 → -80℃ 24小时 → 液氮长期保存
复苏验证：
• 复苏后48小时检测细胞贴壁率（标准≥85%）
• 功能验证：α - SMA免疫荧光染色确认肌成纤维细胞表型
四、售后服务承诺
重发标准：
1. 物流温度记录仪显示解冻温度＞ - 130℃
2. 到货72小时内经检测存在细菌/真菌污染
3. 细胞活性低于85%（需提供台盼蓝染色视频）
4. STR分型与存档数据不匹配
不予重发情形：
1. 未使用原代分离配套培养基导致细胞去分化
2. 与肿瘤细胞共培养后引发的基因表达改变
3. 未按要求进行细胞外基质包被导致贴壁失败
4. 超过7天未进行首次传代造成细胞老化
（注：所有操作需符合生物安全二级实验室规范，建议定期进行细胞因子分泌谱检测以监控功能稳定性）
