一、细胞基本属性
细胞名称
人子宫内膜基质细胞(Human Endometrial Stromal Cells)
细胞别称
HESC;子宫内膜间质细胞;子宫基质细胞
种属来源
人(Homo sapiens)
年龄性别
健康育龄女性(供体筛选无子宫内膜病变史)
组织来源
子宫内膜组织基质层
生长特性
贴壁生长(依赖胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态
长梭形或成纤维样,融合后呈铺路石样排列
细胞代数
P3 - P6(推荐使用代数,确保激素反应特性稳定)
细胞规格
5×10⁵ cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管(含专用冻存液)
培养基
DMEM/F12(含10% FBS + 1%双抗 + 0.5 μg/mL雌二醇)
培养条件
气相:5% CO₂ + 95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件
无血清程序冻存液(含5% DMSO及糖原保护剂),液氮气相长期保存
倍增时间
约72 - 96小时(受激素浓度及培养密度影响)
供应限制
仅限于基础研究,禁止用于生殖医学临床或转基因操作
二、细胞培养操作指南
收货处理
- 冻存管:37℃水浴快速解震,加入3mL预热完全培养基轻柔重悬
- 培养瓶:表面消毒后直接置于CO₂培养箱平衡4小时
传代标准
细胞融合度达80% - 85%(激素敏感型细胞需控制传代频率)
传代比例
1:2至1:3(建议接种密度3×10³ cells/cm²)
消化方法
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA溶液(含0.1%胶原酶)
- 37℃消化3 - 5分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落
注意事项
- 避免连续传代超过10次(防止蜕膜化能力衰减)
- 建议传代后补充10 ng/mL表皮生长因子(EGF)
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方
无血清冻存液(含7.5% DMSO + 10%海藻糖)
细胞密度
冻存浓度:1×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
冻存步骤
- 离心后缓慢滴加预冷冻存液混匀
- 程序降温:4℃ 30分钟 → -80℃ 24小时 → 液氮长期保存
复苏验证
- 复苏后48小时进行活率检测(台盼蓝拒染率≥90%)
- 功能验证:孕酮诱导蜕膜化实验(P4代细胞应呈现典型形态改变)
四、售后服务承诺
重发标准
1. 物流温度记录异常导致细胞失活(需提供温度追踪记录)
2. 收到后72小时内证实真菌/支原体污染(需第三方检测报告)
3. 细胞增殖能力低于标准值(传代三次后仍无法达到50%融合)
4. 特定标记物检测不达标(CD90阳性率<95%)
不予重发情形
1. 未使用原代培养基进行后续培养
2. 擅自进行放射性同位素标记实验
3. 超过建议代数仍要求功能验证
4. 未按规范进行激素同步化处理