一、细胞基本属性
细胞名称：人韧带成纤维细胞（Human Ligament Fibroblasts）
细胞别称：HLF；韧带成纤维细胞；韧带细胞
种属来源：人（Homo sapiens）
年龄性别：健康成人（性别不限，供体筛选无韧带损伤史）
组织来源：韧带组织（经酶消化法分离）
生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被培养器皿）
细胞形态：长梭形或纺锤状，平行排列生长
细胞代数：P3 - P8（确保功能活性与增殖能力）
细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
培养基：成纤维细胞专用培养基（含10% FBS + 成纤维细胞生长因子添加剂）
培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件：无血清冻存液（含DMSO及细胞保护剂）， - 150℃以下长期保存
倍增时间：约48 - 72小时（受培养密度及血清浓度影响）
供应限制：仅供科学研究，不可用于临床或动物实验
二、细胞培养操作指南
收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入5mL预热培养基轻柔混匀
- 培养瓶：75%酒精擦拭表面后静置培养箱1小时平衡温度
传代标准：细胞融合度达80% - 90%（通常每4 - 5天传代一次）
传代比例：1:2至1:3（建议接种密度3×10³ cells/cm²）
消化方法：
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA（含Ca²⁺/Mg²⁺）
- 37℃消化2 - 3分钟，镜下观察细胞间隙增大后终止消化
注意事项：
- 避免剧烈吹打（保护细胞外基质分泌功能）
- 首次换液需在接种后48小时内完成
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及胎牛血清）
细胞密度：1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL（离心后重悬）
冻存步骤：
- 梯度降温程序：4℃ 30分钟 → - 20℃ 2小时 → - 80℃过夜 → 液氮长期存储
复苏验证：
- 复苏后48小时内检测细胞贴壁率（正常≥85%）
- 功能验证：胶原分泌检测（P5代细胞应维持基质合成能力）
四、售后服务承诺
重发标准：
1. 运输过程温度异常导致细胞死亡（需提供物流温度记录）
2. 5日内确认微生物污染（需提供第三方检测报告）
3. 复苏后细胞存活率低于90%（台盼蓝染色验证）
4. 细胞STR分型与数据库不匹配
不予重发情形：
1. 收货后未按规范进行预培养直接冻存
2. 使用非指定培养基导致细胞功能异常
3. 未按操作指南导致消化过度或机械损伤
4. 未定期检测支原体污染影响实验结果
（注：所有操作需符合生物安全二级实验室规范，建议定期进行细胞形态学及功能鉴定。）
