一、细胞基本属性
细胞名称:人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(Human Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblasts)
细胞别称:RA - SF;滑膜成纤维细胞;类风湿关节炎滑膜细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
疾病背景:取自确诊类风湿关节炎患者的滑膜组织(供体信息经伦理审查及知情同意)
组织来源:关节滑膜组织(手术取材并经病理学确认)
生长特性:贴壁生长(依赖胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:典型长梭形或多角形,高核质比,可形成致密单层
细胞代数:P3 - P8(经STR鉴定确保遗传稳定性)
细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管(含专用无血清冻存液)
培养基:DMEM/F12(含10% FBS + 1%双抗+2mM L - 谷氨酰胺+1%非必需氨基酸)
培养条件:气相:5% CO₂ + 95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存
增殖特性:体外传代保持促炎因子分泌能力(IL - 6、MMP - 3表达验证)
供应限制:仅限科学研究,不可用于临床治疗或药物生产
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预热培养基
- 培养瓶:酒精消毒表面后静置培养箱平衡1小时
传代标准:融合度达80% - 90%(建议每周传代1 - 2次)
传代比例:1:2至1:3(推荐接种密度4×10³ cells/cm²)
消化方法:
- 使用0.25%胰酶 - EDTA溶液(含0.02%胶原酶)
- 37℃消化3 - 5分钟,镜下观察细胞边缘卷曲后终止
注意事项:
- 避免机械刮取(防止细胞外基质过度损伤)
- 首次传代建议保留原代培养液50%体积
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO及海藻糖保护剂)
细胞密度:1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL(高密度冻存保障复苏效率)
冻存步骤:
- 预冷冻存管至4℃,细胞悬液分装后梯度降温
- 程序降温:4℃ 30分钟 → - 20℃ 2小时 → - 80℃过夜 → 液氮保存
复苏验证:
- 复苏后48小时检测细胞贴壁率(应≥85%)
- 功能验证:CCK - 8法检测增殖活性(P5代细胞维持炎症表型)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 物流全程超温导致细胞失活(需提供温度监控记录)
2. 7日内经qPCR证实支原体污染(需提供完整检测流程记录)
3. 复苏后存活率低于80%(台盼蓝染色法双人复核)
4. STR分型与申报信息不符
不予重发情形:
1. 使用非配套培养基导致细胞表型漂移
2. 未按规范添加细胞因子影响功能特性
3. 实验操作污染导致交叉感染
4. 液氮保存中断超过24小时
(本产品经ELISA验证TNF - α基础分泌量,提供标准培养操作视频及技术咨询支持)