一、细胞基本属性
细胞名称:人T淋巴细胞(Human T Lymphocytes)
细胞别称:T细胞;T淋巴细胞;CD3+ T细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
年龄性别:健康成人(性别不限,供体经传染病及免疫指标筛查)
组织来源:外周血单个核细胞分离(PBMC分离纯化)
生长特性:悬浮生长(需添加细胞因子维持活性)
细胞形态:圆形或类圆形,表面微绒毛结构明显
细胞代数:P2 - P5(推荐使用代数,确保免疫表型及功能稳定)
细胞规格:1×10^6 cells/冻存管(含无血清冻存液)
培养基:RPMI 1640培养基(含10% FBS+IL - 2 100U/mL+青霉素/链霉素)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:程序降温冻存液(含10% DMSO+血清替代物), - 150℃以下长期保存
增殖特性:IL - 2依赖性,激活后可快速扩增(CD3/CD28抗体刺激后倍增时间约24 - 36小时)
供应限制:仅限科研用途,不可用于临床治疗或基因编辑实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去除冻存液后重悬于预温培养基
- 激活培养:建议添加CD3/CD28抗体磁珠(按1:1比例)进行预激活
传代标准:细胞密度达1×10^6 cells/mL或培养液明显酸化(pH<7.0)
传代方法:
- 离心收集细胞(300×g,5分钟),按密度1×10^6 cells/mL接种新鲜培养基
- 每2 - 3天补充IL - 2(终浓度100U/mL)
注意事项:
- 避免高速离心(>500×g)导致细胞膜损伤
- 长期培养需定期检测CD3/CD28表达水平
- 建议使用低吸附培养瓶减少细胞黏附
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO+40% FBS+50%培养基)
细胞密度:冻存浓度:5×10^6 - 1×10^7 cells/mL
冻存步骤:
- 离心收集活细胞(台盼蓝染色存活率>95%)
- 梯度降温:4℃ 30min → - 80℃过夜 → 液氮长期保存
复苏验证:
- 复苏后24小时流式检测CD3+比例(应≥90%)
- 功能验证:CFSE染色检测增殖能力(72小时增殖指数应>5)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输过程温度记录异常(需提供物流温度监控报告)
2. 7天内证实支原体/微生物污染(需提供第三方检测报告)
3. 复苏后CD3+比例低于85%(流式细胞术检测)
4. 细胞计数与标注数量差异>20%
不予重发情形:
1. 未按规范进行预激活导致细胞失活
2. 使用非推荐细胞因子(如超量IL - 2导致细胞耗竭)
3. 未定期更换培养基导致代谢废物积累
4. 未进行HLA分型检测直接用于共培养实验