一、细胞基本属性
- 细胞名称：人自然杀伤细胞（Human Natural Killer Cells）
- 细胞别称：NK细胞；CD56+CD3-淋巴细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 年龄性别：健康成人（性别不限，供体经传染病筛查及免疫状态评估）
- 组织来源：外周血单核细胞（PBMC）分离
- 生长特性：悬浮生长（依赖细胞因子激活及扩增）
- 细胞形态：圆形或类圆形，激活后体积增大，表面可见颗粒状结构
- 细胞代数：原代细胞或激活后P0 - P3（功能性扩增阶段）
- 细胞规格：1×10^6 cells/冻存管（含冻存保护液）或5×10^6 cells/T25培养瓶（活化状态）
- 培养基：NK细胞专用培养基（含IL - 2、IL - 15等细胞因子及10% FBS）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：程序降温冻存液（含DMSO及细胞因子稳定剂），液氮长期保存（- 196℃）
- 增殖能力：激活后3 - 5天进入对数生长期（依赖细胞因子浓度及培养密度）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床治疗或体外诊断试剂开发
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心后重悬于预热培养基
- 培养瓶：直接置于CO₂培养箱，静置4小时后轻柔混匀
- 激活方法：
- 使用IL - 2（100 - 200 IU/mL）及特异性激活因子（如K562 - mbIL21）
- 每48 - 72小时补充新鲜细胞因子
- 传代标准：细胞密度达1×10^6 - 2×10^6 cells/mL（悬浮细胞聚集成团时需轻柔吹散）
- 换液频率：每2 - 3天半量换液，维持细胞因子有效浓度
- 注意事项：
- 避免剧烈震荡或高速离心（防止细胞颗粒释放导致凋亡）
- 定期检测CD16/CD56表达及细胞毒性功能（LDH释放法）
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含5% DMSO + 90% FBS + 5%细胞因子稳定剂）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10^6 - 1×10^7 cells/mL
- 冻存步骤：
- 离心收集细胞，预冷冻存液重悬后分装至冻存管
- 程序降温：4℃ 30分钟 → - 80℃ 24小时 → 液氮长期保存
- 复苏验证：
- 复苏后存活率≥85%（台盼蓝染色法）
- 功能验证：48小时内恢复细胞毒性（K562细胞杀伤实验）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
1. 运输过程温度异常导致细胞失活（需提供物流温度记录）
2. 到货3天内证实微生物污染（需提供第三方检测报告）
3. 细胞表型纯度＜90%（CD56+CD3 - 流式检测结果）
4. 未达到标注细胞数量（误差＞20%）
- 不予重发情形：
1. 未按说明添加细胞因子导致细胞凋亡
2. 使用非配套培养基或自行修改培养方案
3. 复苏后超72小时未进行功能性检测
4. 未执行细胞表型鉴定直接用于实验
