一、细胞基本属性
细胞名称:人脾星状细胞(Human Splenic Stellate Cells)
细胞别称:脾星状细胞;脾HSC;脾基质细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
年龄性别:健康成人(性别不限,供体筛选无脾脏疾病史)
组织来源:脾脏组织经胶原酶消化分离
生长特性:贴壁生长(依赖基质胶包被培养器皿)
细胞形态:星形多突状,胞质内含脂滴颗粒
细胞代数:P2 - P6(维持表型稳定性与功能性)
细胞规格:5×10⁵ cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:Stellate Cell Medium(含1% FBS + 肝星状细胞生长因子添加剂)
培养条件:气相:5% CO₂ + 95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含7% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存
倍增时间:~72 - 96小时(视活化状态及培养条件)
供应限制:仅限体外研究,不可用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
• 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去冻存液后重悬于预热培养基
• 培养瓶:酒精消毒外壁,静置培养箱4小时待细胞贴壁
传代标准:细胞密度达70% - 80%(避免过度融合引发自发活化)
传代比例:1:2(推荐接种密度3×10³ cells/cm²)
消化方法:
• 使用0.25%胰酶 - 胶原酶混合消化液
• 37℃消化3 - 5分钟,轻拍培养瓶促使细胞脱落
注意事项:
• 全程避免剧烈吹打(防止脂滴流失影响表型)
• 首次换液需保留50%原培养基以维持细胞稳态
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含7% DMSO + 10% FBS)
细胞密度:冻存浓度:5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
• 预冷冻存管至4℃,细胞悬液分装后梯度降温
• 程序降温:4℃ 30min → -80℃ 24h → 液氮长期保存
复苏验证:
• 复苏后48小时检测α - SMA表达(未活化状态应≤10%)
• 功能验证:I型胶原分泌量检测(基础分泌量≤50ng/10⁶ cells)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 干冰运输全程温度> - 130℃(需物流温度记录证明)
2. 到货7天内证实支原体污染(提供电镜或PCR结果)
3. 自发活化率>15%(需流式细胞术检测报告)
不予重发情形:
1. 使用胎牛血清浓度>5%导致细胞异常活化
2. 未使用低氧培养箱(氧浓度>5%)诱发氧化应激
3. 机械刺激(如高频震荡)造成脂滴结构破坏
4. 未按协议进行细胞静息态维持操作
(注:所有实验操作需遵守《人类原代细胞研究伦理规范》,本产品禁止用于基因编辑或转基因研究)