一、细胞基本属性
- 细胞名称：人牙周膜成纤维细胞（Human Periodontal Ligament Fibroblasts）
- 细胞别称：HPLF；牙周膜成纤维细胞；牙周韧带细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 年龄性别：健康成人（性别不限，供体筛选无牙周疾病史）
- 组织来源：牙周膜组织（通过酶消化法分离）
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被培养器皿）
- 细胞形态：典型长梭形或纺锤状，贴壁后呈放射状排列
- 细胞代数：P3 - P8（确保细胞功能活性与分化潜能）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：成纤维细胞专用培养基（含10% FBS + 成纤维细胞生长因子添加剂）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含DMSO及细胞保护剂）， - 150℃以下长期保存
- 倍增时间：~48 - 72小时（依赖培养密度与生长因子浓度）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床治疗或药物生产
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入5mL预热培养基轻柔混匀离心后重悬
- 培养瓶：75%酒精表面消毒后静置于培养箱平衡1小时，再更换新鲜培养基
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（通常每3 - 5天传代一次）
- 传代比例：1:2至1:4（推荐接种密度4×10³ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25% Trypsin - EDTA（含0.05%胶原酶辅助消化）
- 37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落，镜下确认后立即终止
- 注意事项：
- 避免剧烈吹打（防止机械损伤细胞骨架）
- 传代后12小时内避免频繁移动培养瓶以确保贴壁
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及胎牛血清替代物）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤：
- 离心收集细胞后缓慢滴加冻存液混匀
- 程序降温：4℃ 30分钟 → - 20℃ 2小时 → - 80℃过夜 → 液氮长期保存
- 复苏验证：
- 复苏后48小时内检测细胞活性（台盼蓝染色存活率≥90%）
- 功能验证：Ⅰ型胶原分泌检测（P5代细胞应维持基质合成能力）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
1. 运输过程温度异常导致细胞死亡（需提供温度记录或干冰残留证据）
2. 5天内确认细菌/真菌污染（需提供污染样本检测结果）
3. 细胞贴壁率低于80%（需提供复苏后24小时显微图像）
4. STR鉴定结果与备案信息不符
- 不予重发情形：
1. 客户未按规范进行预包被培养器皿处理
2. 使用高浓度血清或其他非推荐培养基导致细胞分化
3. 自行修改冻存液配方引发细胞损伤
4. 未按要求进行周期性支原体检测
注：以上内容基于标准操作流程，具体实验需根据研究需求优化参数。
