一、细胞基本属性
1. 细胞名称:小鼠表皮干细胞(Mouse Epidermal Stem Cells)
2. 细胞别称:表皮基底干细胞;皮肤干细胞;表皮祖细胞
3. 种属来源:小鼠(Mus musculus)
4. 年龄性别:健康成年小鼠(性别不限,供体筛选无皮肤病及免疫缺陷史)
5. 组织来源:表皮基底层(毛囊间表皮或毛囊隆突区)
6. 生长特性:贴壁生长(依赖胶原或纤维连接蛋白包被培养器皿)
7. 细胞形态:单层克隆样聚集,呈多边形或铺路石样,核质比高
8. 细胞代数:P3 - P8(维持干性标志物表达及增殖潜能)
9. 细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(无血清冻存体系)
10. 培养基:表皮干细胞专用培养基(含低血清、表皮生长因子及Wnt信号通路激活剂)
11. 培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
12. 冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂), -150℃以下长期保存
13. 倍增时间:约24 - 48小时(依赖生长因子浓度及细胞密度)
14. 供应限制:仅限科学研究,不可用于临床或活体移植
二、细胞培养操作指南
1. 收货处理
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去冻存液后重悬于预热培养基
- 培养瓶:75%酒精表面消毒,静置培养箱2小时平衡后换液
2. 传代标准:克隆融合度达70% - 80%(避免过度融合导致分化)
3. 传代比例:1:3至1:4(推荐接种密度3×10³ cells/cm²)
4. 消化方法:使用0.25%胰酶 - EDTA(含钙离子螯合剂),37℃消化3 - 5分钟,轻柔吹打至细胞脱离
5. 注意事项:消化后立即加入含血清培养基终止反应,传代后48小时内避免频繁观察,减少物理扰动
三、细胞冻存操作规范
1. 冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO、20%胎牛血清及糖原保护剂)
2. 细胞密度:冻存浓度:5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
3. 冻存步骤:离心收集细胞,预冷冻存液重悬;程序降温:4℃ 30分钟→ - 80℃ 24小时→液氮长期保存
4. 复苏验证:复苏存活率≥85%(台盼蓝染色法),干性标志物检测:KRT15、Integrin β1阳性率>90%
四、售后服务承诺
1. 重发标准
- 1. 运输过程温度记录异常导致细胞失活(需提供物流温度曲线)
- 2. 到货72小时内检测出细菌/真菌污染(需提供污染图像证据)
- 3. 细胞活性低于85%(需提供台盼蓝染色结果)
- 4. 干细胞标志物表达不符合技术文档
2. 不予重发情形
- 1. 使用非配套培养基或自行添加未经验证的生长因子
- 2. 解冻后未按规范进行离心去DMSO操作
- 3. 培养过程中接触分化诱导因子(如高钙离子浓度)
- 4. 未定期进行支原体检测导致交叉污染