一、细胞基本属性
细胞名称:小鼠毛囊角质细胞(Mouse Hair Follicle Keratinocytes)
细胞别称:MFKC;毛囊上皮细胞;皮肤角质形成细胞
种属来源:小鼠(Mus musculus)
年龄性别:健康成年小鼠(性别不限,供体无皮肤病变史)
组织来源:毛囊组织(分离自真皮-表皮交界处)
生长特性:贴壁生长(依赖胶原包被培养器皿)
细胞形态:典型多角形或扁平铺路石样,接触抑制后形成紧密单层
细胞代数:P3 - P8(确保角质化相关基因稳定表达)
细胞规格:1×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:Epilife培养基(含1%钙离子+角质细胞生长添加剂)
培养条件:气相:5% CO₂ + 95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞特异性保护剂),液氮长期保存
倍增时间:约48 - 72小时(与细胞分化状态相关)
供应限制:仅用于基础研究,禁止临床或药物开发用途
二、细胞培养操作指南
收货处理:
冻存管需37℃水浴快速解冻后转移至预温培养基离心洗涤
培养瓶收货后静置培养箱4小时再更换新鲜培养基
传代标准:细胞融合度达80% - 85%(避免过度融合诱发分化)
传代比例:1:2至1:3(建议接种密度3×10³ cells/cm²)
消化方法:
使用0.25%胰酶 - EDTA溶液(含0.1%胶原酶)
37℃消化3 - 5分钟,机械轻拍促进细胞脱落
注意事项:
消化终止后需离心去除酶残留
传代后12小时补充10ng/mL表皮生长因子
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO+海藻糖保护剂)
细胞密度:冻存浓度1×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
细胞悬液分装至冻存管后立即进行程序降温
推荐降温程序:4℃平衡30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期储存
复苏验证:
复苏后48小时检测角蛋白K14/K10表达(免疫荧光法)
屏障功能验证:Trans - epithelial electrical resistance(TEER值≥200Ω·cm²)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 物流温度记录异常导致细胞失活
2. 到货7日内经qPCR证实支原体污染
3. 细胞角蛋白标志物表达缺失
4. STR分型与数据库不匹配
不予重发情形:
1. 未使用指定胶原包被培养器皿
2. 自行添加分化诱导剂导致细胞异常
3. 超过推荐代数(P8)继续传代
4. 未执行标准复苏流程直接实验