一、细胞基本属性
细胞名称:NRK - 52E大鼠肾细胞
细胞别称:NRK细胞;大鼠肾近曲小管上皮细胞
种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
年龄性别:新生大鼠(性别不限,供体健康无肾病史)
组织来源:肾脏近曲小管组织
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:多角形或铺路石样单层,接触抑制后呈紧密连接
细胞代数:P3 - P10(推荐使用代数以保证功能稳定性)
细胞规格:1×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含专用冻存液)
培养基:DMEM/F12(含5% FBS + 1% ITS添加剂+10mM HEPES)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存
倍增时间:约24 - 48小时(依赖血清浓度及培养密度)
供应限制:仅限科研用途,不可用于临床或动物实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
冻存管:37℃水浴解冻后离心去冻存液,重悬于预热培养基
培养瓶:酒精消毒表面后静置培养箱4小时再换液
传代标准:细胞融合度达80% - 90%(建议每2 - 3天传代)
传代比例:1:3至1:4(推荐接种密度3×10⁴ cells/cm²)
消化方法:
使用0.25%胰酶 - EDTA(含0.02%胶原酶)
37℃消化3 - 5分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落
注意事项:
消化后需完全中和胰酶(残留酶影响贴壁)
首次传代前需过夜静置培养(促进细胞贴壁)
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含8% DMSO + 20% FBS)
细胞密度:推荐冻存浓度1×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
离心后缓慢逐滴加入冻存液
程序降温:4℃ 1h → - 80℃ 24h → 液氮长期储存
复苏验证:
复苏存活率≥85%(台盼蓝染色法)
功能验证:P5代细胞应保持正常钠 - 葡萄糖协同转运活性
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输过程温度异常导致细胞失活(需提供物流温度记录)
2. 到货48小时内检测出支原体污染(需第三方检测报告)
3. STR谱系与ATCC数据库比对不一致
不予重发情形:
1. 未使用胶原包被培养器皿导致贴壁失败
2. 自行修改培养基成分引发细胞分化
3. 未按规范进行传代导致细胞老化
4. 复苏后未在12小时内更换新鲜培养基