一、细胞基本属性
细胞名称
PC12低分化+GFP大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞
细胞别称
PC12 - GFP细胞;大鼠嗜铬细胞瘤细胞;GFP标记低分化PC12细胞
种属来源
大鼠(Rattus norvegicus)
组织来源
肾上腺嗜铬细胞瘤组织
生长特性
贴壁生长(需基质包被培养器皿)
细胞形态
低分化状态下呈圆形或短梭形,GFP荧光标记均匀表达
细胞代数
P3 - P10(建议使用P5 - P8代以保证荧光稳定性与功能特性)
细胞规格
1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基
RPMI 1640培养基(含10%马血清+5% FBS+1%青霉素/链霉素+2mM L - 谷氨酰胺)
培养条件
气相:5% CO₂+95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件
无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂), - 150℃以下长期保存
荧光特性
稳定表达绿色荧光蛋白(Ex/Em = 488nm/507nm),传代后需避光保存
供应限制
仅限科研用途,不可用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
收货处理
• 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预热培养基
• 培养瓶:75%酒精擦拭表面,静置培养箱平衡1小时
传代标准
细胞密度达80% - 90%融合(通常每2 - 3天传代一次)
传代比例
1:3至1:6(建议接种密度1×10^4 cells/cm²)
消化方法
• 使用0.25% Trypsin - EDTA(含1mM EDTA)
• 37℃消化3 - 5分钟,轻拍培养瓶促使细胞脱落
注意事项
• 避免频繁观察荧光以防光漂白(观察时关闭培养箱光源)
• 传代后48小时内需更换培养基以维持GFP表达稳定性
• 建议使用胶原蛋白包被培养皿增强贴附性
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方
基础培养基+20% FBS+10% DMSO
细胞密度
冻存浓度:5×10^6 - 1×10^7 cells/mL
冻存步骤
• 消化后离心收集细胞,重悬于预冷冻存液
• 程序降温:4℃ 30分钟→ - 80℃ 24小时→液氮长期保存
复苏验证
• 复苏后48小时检测GFP荧光强度(流式细胞术阳性率≥98%)
• 功能验证:神经生长因子(NGF)诱导分化实验(低分化特性验证)
四、售后服务承诺
重发标准
1. 运输过程干冰耗尽导致细胞死亡(需提供温度记录证明)
2. 到货7日内检出支原体污染(需提供第三方检测报告)
3. GFP表达率低于90%(流式细胞术检测)
4. 细胞STR鉴定与大鼠种属不符
不予重发情形
1. 使用非推荐包被基质导致细胞贴壁失败
2. 长期暴露于荧光显微镜光源引发光毒性损伤
3. 未按规范添加NGF导致自发分化
4. 超代次使用(P10以上)引发的功能异常