一、细胞基本属性
- 细胞名称：人胰腺癌相关成纤维细胞永生化株（Human Pancreatic Carcinoma - Associated Fibroblasts, Immortalized）
- 细胞别称：HPCCAFs；胰腺癌CAFs；永生化胰腺癌成纤维细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 年龄性别：胰腺癌患者（年龄性别不限，供体经病理学确诊）
- 组织来源：胰腺癌组织间质分离（经胶原酶消化筛选）
- 生长特性：贴壁生长（依赖细胞外基质，永生化后增殖能力增强）
- 细胞形态：长梭形或星状，呈典型成纤维细胞样辐射状排列
- 细胞代数：P3 - P15（永生化处理确保长期稳定性，遗传背景一致）
- 细胞规格：1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（无血清冻存液）
- 培养基：DMEM/F12（含10% FBS + 1%双抗+成纤维细胞生长因子添加剂）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：~24 - 48小时（永生化后增殖速率提升）
- 供应限制：仅限肿瘤微环境研究，禁止临床或体内移植应用
二、细胞培养操作指南
- 收货处理
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去冻存液后重悬于预热培养基
- 培养瓶：酒精擦拭表面，静置培养箱4小时待细胞贴壁
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（永生化细胞建议每2 - 3天传代）
- 传代比例：1:3至1:5（推荐接种密度3×10^4 cells/cm²）
- 消化方法
- 使用0.25% Trypsin - EDTA（含0.02%胶原酶）
- 37℃消化3 - 5分钟，镜下观察细胞脱离后终止
- 注意事项
- 避免消化不足（成纤维细胞间连接紧密）
- 首次传代前需更换培养基去除非贴壁杂质
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及海藻糖保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10^6 cells/mL
- 冻存步骤
- 离心收集细胞，轻柔重悬于预冷冻存液
- 程序降温：4℃ 30分钟→ - 20℃ 2小时→ - 80℃过夜→液氮储存
- 复苏验证
- 复苏存活率≥95%（台盼蓝染色法）
- 功能验证：α - SMA免疫荧光染色（P10代内表达率需＞90%）
四、售后服务承诺
- 重发标准
- 运输温度异常导致细胞死亡（需提供温度记录证据）
- 72小时内证实支原体污染（需提供第三方检测报告）
- 细胞永生化标志物（如SV40 LT抗原）表达缺失
- STR分型与数据库不匹配
- 不予重发情形
- 未按规范使用含血清培养基导致分化
- 自行采用非推荐消化酶（如胰酶浓度过高）
- 超过建议代次（P15后）导致的特性改变
- 未定期进行端粒酶活性监测
