一、细胞基本属性
- 细胞名称：人肝窦内皮细胞永生化（Human Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells Immortalized）
- 细胞别称：HHSEC；肝窦内皮细胞；肝血窦内皮细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 年龄性别：健康成人（性别不限，供体筛选无肝脏疾病史）
- 组织来源：肝组织窦状隙段
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被基质）
- 细胞形态：扁平梭形或铺路石样单层排列，接触抑制后呈规则多边形
- 细胞代数：P3 - P10（经永生化处理，功能稳定且增殖可控）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶 或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：肝窦内皮专用培养基（含1% FBS+肝细胞生长因子+内皮细胞添加剂）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂）， - 150℃以下长期保存
- 倍增时间：~36 - 60小时（与培养密度及基质包被相关）
- 供应限制：仅限体外研究使用，不可用于临床治疗或异种移植
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入5mL预温培养基轻柔混匀
- 培养瓶：75%酒精表面消毒后静置培养箱平衡1小时
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（推荐每2 - 3天传代一次）
- 传代比例：1:2至1:4（建议接种密度4×10³ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA（含0.02%胶原酶）
- 37℃消化2 - 3分钟，镜下确认细胞边缘卷曲后终止反应
- 注意事项：
- 消化过程中避免剧烈吹打（保护VEGFR - 3表面标记）
- 首次换液需保留50%原培养基以维持细胞极性
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及海藻糖保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1.5×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤：
- 离心收集细胞后轻柔重悬于冻存液
- 程序降温：4℃ 30min → - 20℃ 1.5h → - 80℃过夜 → 液氮长期储存
- 复苏验证：
- 复苏后12小时检测细胞贴壁率（应≥85%）
- 功能验证：CD31免疫荧光染色及LDL摄取实验（P5代细胞需保持特性）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 物流温控异常导致细胞失活（需提供运输温度记录）
- 5个工作日内证实支原体污染（需提供荧光PCR结果）
- 复苏后活率低于85%（台盼蓝染色法复测确认）
- 端粒酶活性检测不符合永生化特征
- 不予重发情形：
- 未使用配套基质包被培养器皿
- 擅自添加超过标准浓度的生长因子
- 连续培养超过15代未进行特性验证
- 未按规范进行肝窦特异性标记物鉴定
