一、细胞基本属性
- 细胞名称：永生化鸭脑微血管内皮细胞（Immortalized Duck Brain Microvascular Endothelial Cells）
- 细胞别称：iDBMEC；鸭脑内皮细胞；脑微血管内皮细胞
- 种属来源：鸭（Anas platyrhynchos）
- 年龄性别：健康成鸭（性别不限，供体筛选无神经系统疾病史）
- 组织来源：脑组织微血管段
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被培养器皿）
- 细胞形态：单层铺路石样排列，接触抑制后呈规则多边形
- 细胞代数：P5 - P20（经永生化处理，遗传稳定且功能可重复）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：专用内皮细胞培养基（含5% FBS +内皮生长因子及永生化维持添加剂）
- 培养条件：气相：5% CO₂+95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含8% DMSO及低温保护剂），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：~36 - 48小时（与培养密度及基质包被相关）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或食品生产
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入5mL预热培养基轻柔混匀。
- 培养瓶：75%酒精表面消毒后，静置培养箱1小时平衡温度。
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（推荐每2 - 3天传代一次）
- 传代比例：1:3至1:4（建议接种密度3×10³ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰酶 - EDTA（含0.1%胶原酶）。
- 37℃消化2 - 3分钟，镜下观察细胞边缘卷曲后终止。
- 注意事项：
- 避免机械吹打过猛（保护紧密连接结构）。
- 首次传代后12小时内更换培养基。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含8% DMSO及海藻糖保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤：
- 离心后重悬细胞于冻存液，分装至冻存管。
- 程序降温：4℃ 30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期储存。
- 复苏验证：
- 复苏后12小时存活率≥90%（台盼蓝染色法）。
- 功能验证：Ⅷ因子免疫荧光染色及低密度脂蛋白摄取实验。
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输温度异常导致细胞失活（需提供物流温度记录）。
- 5日内证实微生物污染（需提供污染检测报告）。
- 细胞复苏存活率低于85%（经第三方检测确认）。
- 永生化标志物（如SV40抗原）表达缺失。
- 不予重发情形：
- 解冻后超48小时未进行贴壁培养。
- 使用非指定培养基或包被条件。
- 未按规范进行传代导致细胞老化。
- 未留存冻存备份导致无法溯源。
