一、细胞基本属性
- 细胞名称：猪小肠上皮细胞（永生化）
- 细胞别称：SIEC；永生化小肠上皮细胞；猪肠上皮细胞
- 种属来源：猪（Sus scrofa domesticus）
- 年龄性别：健康猪只（性别不限，供体筛选无肠道疾病史）
- 组织来源：小肠组织上皮层
- 生长特性：贴壁生长（需胶原蛋白涂层培养器皿）
- 细胞形态：典型“铺路石样”单层，紧密连接形成连续屏障
- 细胞代数：P10 - P20（永生化处理后稳定增殖，保留原代细胞功能特性）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：专用小肠上皮细胞培养基（含5% FBS+EGF/胰岛素等生长因子+抗生素）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含DMSO及细胞保护剂），液氮长期保存（-196℃）
- 增殖特性：稳定增殖（SV40 LT抗原介导永生化，经STR鉴定无交叉污染）
- 供应限制：仅限体外科研使用，不可用于临床或活体实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后重悬于5mL预热培养基
- 培养瓶：酒精消毒表面，静置培养箱4小时待细胞贴壁
- 传代标准：融合度达90% - 95%（建议每4 - 5天传代）
- 传代比例：1:3至1:4（推荐初始接种密度1×10⁴ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰酶 - EDTA（含钙离子螯合剂）
- 37℃消化3 - 5分钟，离心后完全去除消化酶残留
- 注意事项：
- 永生化细胞需定期检测核型稳定性（建议每10代进行STR分析）
- 传代后12小时补充新鲜培养基以促进屏障功能重建
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO+海藻糖保护剂）
- 冻存密度：2×10⁶ cells/mL（离心后高密度冻存提升复苏效率）
- 冻存程序：
- 细胞悬液分装至冻存管，立即置于程序降温盒（-1℃/分钟）
- 梯度保存：4℃ 1h → -80℃过夜 → 液氮长期存储
- 复苏验证：
- 存活率≥90%（台盼蓝染色+CCK - 8增殖曲线双重验证）
- 功能检测：跨膜电阻值（TEER）≥200 Ω·cm²（P15代内维持屏障完整性）
四、售后服务承诺
- 重发保障：
- 干冰运输中温度异常导致细胞失活（需提供物流温度记录）
- 到货72小时内检测出支原体污染（需提供荧光PCR结果）
- 细胞复苏存活率低于85%（经第三方检测复核）
- 永生化标志基因（如SV40 LT）表达缺失
- 免责条款：
- 客户未使用指定培养基或涂层培养器皿
- 细胞传代超过P20未进行稳定性检测
- 液氮储存中断导致冻存管反复冻融
- 未按要求进行功能验证直接用于数据发表
